Описание:
Бешенство – это острое зоонозное заболевание вирусной этиологии, которым болеют теплокровные животных и человек. Для заболевания характерно прогрессирующее поражение центральной нервной системы и 100% летальность.
Причины возникновения:
Бешенство – вирусное инфекционное заболевание. Нейротропный вирус относится к семейству Лисовирусов. Имеют пулевидную форму. Вирус имеет однонитчатую РНК.
Существует 2 вида вируса бешенства: циркулирующий в естественных условиях среди животных уличный (дикий) и фиксированный вирус - применяется для получения антирабической вакцины.
Репликация (размножение) вируса бешенства в нервных клетках сопровождается формированием телец Бабеша-Негри. Вирус бешенства неустойчивый во внешней среде, и погибает через 2 минут кипячения.
Резервуаром служат плотоядные животные – лисы, енотовидные собаки, кошки, собаки. Летучие мыши, которые и выделяют вирус во внешнюю среду. Наиболее высокая вероятность заражения наблюдается в весеннее-летний период.
Бешенство распространено по всему земному шару, однако не встречается в Антарктиде, Австралии, островных государствах, а так же в Швеции, Испании, Норвегии и некоторых других государствах.
Патогенез:
Входными воротами для вируса служат повреждения кожных покровов и слизистых оболочек. Из места внедрения рабический вирус распространяется по периневральным пространствам, достигает центральной нервной системы, где фиксируется и начинает реплицироваться в нейронах, продолговатом мозге, гипокампе, узлах основания мозга, локализируется в спинном мозге. Это обеспечивает повышение рефлекторной возбудимости, и связанное с этим развитие параличей. Наблюдаются дыхательной мускулатуры, связанные с поражением блуждающего, языкоглоточного и подъязычного черепно-мозговых нервов. Раздражение симпатической нервной системы обуславливает повышенное слюно- и потоотделение. Поражение блуждающего нерва обеспечивает нарушение в работе сердечно-сосудистой системе. Из центральной нервной системы вирус «отсеивается» в различные органы, в первую очередь слюнные железы, надпочечники, почки, скелетные мышцы, кожу, сердце, вследствие чего происходят дистрофические изменения миокарда, кровоизлияния в слизистых и серозных оболочках.
Симптомы:
Инкубационный период длится от 10 до 90 дней. Продромальные явления длятся от 1 до 3 дней. Первые признаки – на месте укуса – припухлость, покраснение раны, рубца, зуд, неврологические боли по ходу нервных путей, расположенных вблизи к месту укуса. Беспокоит недомогание, повышенная чувствительность к слуховым и зрительным раздражителям, нарушение сна с кошмарами. Больной испытывает беспричинный страх.
Через 2-3 дня начинается период разгара заболевания. Появляется и , расстройства дыхания и глотания. В паралитический период заболевания наблюдается уменьшение всех симптомов, психическое успокоение, прекращение гидрофобии и аэрофобии, появляется возможность пить и есть. Эта фаза называется также «зловещее успокоение».
Далее развиваются параличи верхних и нижних конечностей, черепно-мозговых нервов. Развитие чаще всего идет по типу восходящего паралича Ландри. Нарушается функция тазовых органов. Температура тела повышается до 42С. Смерть наступает от паралича сердечного или дыхательного центра. Общая продолжительность заболевания – от 3 до 7 дней.
Диагностика:
В диагностике бешенства очень важную роль играет эпиданамнез. При беседе пациент или родственники могут сообщить о недавнем контакте с животными.
Материал для посмертной диагностики – биоптаты кожи, мозга.
В срезах мозга можно обнаружить эознофильные тельца Бабеша-Негри, рамер их составляет до 10 мкм. Эти тельца предсталяют сосбой скопление вирусных нуклекапсидов.
Используется метод иммунофлюорисценции, постановка биологической пробы.
Современным методом диагностики заболевания является обнаружение вирусного антигена в отпечатках, снятых с оболочки глаза.
Лечение:
Для лечения назначают:
Бешенство – заболевание со 100% летальностью, и патогенетического лечения не существует.
Возможно назначение лишь симптоматического лечения – обезболивающих, противосудорожных, снотворных средств. На этапе развития дыхательных расстройств показано проведение .
В медицине известно лишь несколько клинических случаев излечения от бешенства, когда уже начались проявления заболевания.
Так, в США в 2005году больная бешенством Джина Гис была введена в искусственную кому на фоне применения иммуностимуляции. После проведенной недели в коме девушка выписалась из больницы с выздоровлением. Данный метод лечения был назван Милуокским протоколом, однако он дает эффективный результат далеко не во всех случаях.
Профилактика:
Разработаны первичные и вторичные профилактические меры в отношении бешенства.
С целью первичной профилактики проводится вакцинация всех домашних и сельскохозяйственных животных. Необходимо своевременное обнаружение природных очагов инфекции и их уничтожение.
Профилактическая иммунизация показана лицам, чья профессия связана с повышенным риском заражения бешенством, например, охотники, ветеринары, лесники и т.д.
Если укус животным все-таки произошел, то животное следует доставить к ветеринару для осмотра. Такое животное подлежит обязательному 10-дневному карантину. Если в указанный срок животное осталось живым и не изменило своего поведения, то вероятно, оно здорово и риска заболеть нет. В противном случае надо немедленно начинать экстренную профилактику бешенства.
К методам неспецифической профилактики следует отнести асептическую обработку раны. Место укуса обрабатывают проточной водой, мылом, глубокие повреждения необходимо промыть при помощи катетера. Рану следует вести открытым способом, без наложения швов.
Специфическая профилактика бешенства предполагает введение комбинации иммуноглобулина и антирабической вакцины.
Самым эффективным методом является пассивная иммунизация антирабическим иммуноглобулином или антирабической сывороткой с последующей активной иммунизацией (вакцинацией). Пассивную и активную иммунизацию проводят одновременно, вводя препараты в разные места.
Показания к введению антирабической вакцинации.
Вакцинопрофилактику следует немедленно начать в следующих ситуациях:
- при всех укусах и других повреждениях кожного покрова, ослюнении кожи и слизистых оболочек, нанесенных животным с симптомами бешенства, подозрительными на бешенство или неизвестными животными;
- если рана была нанесена предметом, загрязненным мозгом или слюной бешенного животного;
- если одежда при укусе повредилась зубами животного;
- укус был осуществлен через тонкую или вязанную ткань;
- при укусах, ослюнении и нанесении здоровым в момент контакта животным, если оно в течение 10 дней после этого заболело, погибло или исчезло;
- укус произведен дикими грызунами;
- при явном ослюнении или повреждении кожных покровов человеком с диагностированным бешенством.
Прививки не проводят, если:
- укус произошел через очень плотную или многослойную одежду;
- нанесение повреждений не хищными птицами;
- укус нанесен домашними мышами или крысами в неэпидемических по бешенству районах; - при случайном употреблении термически обработанного мяса и молока бешеных животных;
- если в течение периода наблюдения животное не заболело;
- укус произведен раньше, чем 10 дней до предполагаемого заражения животного;
- при легком ослюнении и неглубоких укусах, которые были нанесены животными без клинических проявлений бешенства, при благоприятных данных (малая вероятность случая бешенства для данного района, изолированное содержание животного, укус был спровоцирован пострадавшим, животное вакцинировано против бешенства). Но и в этом случае за животным устанавливают наблюдение сроком на 10 дней с целью начать прививки в случае проявления у животного симптомов бешенства, а также гибели или исчезновения;
- при спровоцированном ослюнении неповрежденных кожных покровов неизвестным домашним животным в благополучных по бешенству областях;
- в случаях контакта с человеком, больным бешенством, при отсутствии явного ослюнения слизистых оболочек или повреждения кожных покровов.
С целью активной иммунизации вакцину вводят внутримышечно по 1 мл 5 раз по следующей схеме: в день инфицирования, затем на 3, 7, 14 и 28-й день. При вакцинации по этой схеме удается достичь удовлетворительного иммунитета. По рекомендациям Всемирной Организации Здравоохранения следует провести еще 6-ю рекомендует инъекцию через 90 дней после первой.
В месте инъекции могут проявляться побочные эффекты - болезненность, отечность и уплотнение мягких тканей. Иногда эти реакции проявляются в более выраженной форме. Кроме того, возможно повышение температуры до 38 С и выше, артриты, увеличение лимфоузлов. Может беспокоить головная боль, общая слабость, и аллергические реакции.
Прививки против бешенства можно проводить как в амбулаторных условиях, так и стационарно. Госпитализация рекомендована лицам с тяжелыми укусами, жителям сельских районах; лица, прививающиеся повторно; лица, страдающие заболеваниями нервной системы, сопутствующей аллергией; беременные, а также лица, привитые другими препаратами в течение предшествующих двух месяцев.
Особое внимание стоит уделить вакцинации на фоне приема цитостатиков и кортикостероидов. В таком случае необходимо провести исследование уровня антител с целью решения вопроса о дополнительной вакцинации.
Во время проведения активной иммунизации нужно следить за состоянием пациента. При жалобах на ухудшение состояния показана госпитализация, а проведение прививок временно приостанавливается. Пациента необходимо проконсультировать у смежных специалистов – терапевта и невролога. Дальнейшее проведение вакцинации решается комиссионным осмотром в составе невролога, рабиолога и терапевта.
Во время курса вакцинации и в течение 6 месяцев после него нельзя употреблять алкогольные напитки. Это необходимо для обеспечения должного уровня поствакцинального иммунитета и предупреждения поствакцинальных реакций.
Использование иных вакцин одновременно с антирабической не допускается, только в случае необходимости может быть проведена экстренная профилактика . Заболевшим бешенством вакцинацию не проводят.
Возбудитель бешенства относится к семейству Rhabdoviridae (рабдовирусы).
Семейство это включает вирусы бешенства, везикулярного стоматита и другие вирусы, вызывающие заболевания у животных и насекомых.
На протяжении тысячелетий все человечество страдало от этой страшной болезни - бешенства. Упоминание об этом заболевании встречается в "Илиаде" Гомера, трудах Аристотеля и Авиценны. В I веке до н. э. римский ученый Цельсий предложил выжигать укушенные места каленым железом. Это болезненное мероприятие спасало только в том случае, если рана была невелика и прижигание производилось немедленно после укуса. Можно рассказывать еще о многих средствах, но все они оказывались малоэффективными.
Впервые бешенство изучил Л. Пастер в 1880 г.
В 1886 г. группа одесских врачей на свои средства командировала Н. Ф. Гамалея к Пастеру в Париж для ознакомления с методом приготовления вакцины против бешенства. После его возвращения в Одессе была открыта лаборатория, где изготовлялась антирабическая вакцина.
Морфологическая структура . Возбудитель бешенства имеет палочковидную (пулевидную) форму, один конец которой плоский, другой - вытянутый. Размер 80-180 нм. Вирион содержит однонитчатую РНК, окруженную капсидом. Снаружи капсид покрыт оболочкой, в состав которой входят гликопретеиды и гликолипиды. В оболочке имеются шиловидные образования (пепломеры).
В цитоплазме пораженных вирусом клеток образуются специфические включения, описанные Бабешем (1892) и Негри (1903). Поэтому их называют тельцами Бабеша - Негри. Величина этих телец от 3-4 до 20 мкм. Они разной формы, чаще сферической, но бывают овальной и многоугольной. Кислые красители окрашивают их в рубиново-красный цвет.
Тельца Бабеша - Негри располагаются в цитоплазме нервных клеток головного мозга. Обнаружение телец Бабеша - Негри имеет диагностическое значение.
Культивирование . Вирус бешенства культивируется в мозговой ткани мышей, цыплят, кроликов, в куриных эмбрионах, эмбрионах телят, овец и культурах клеток разного вида животных.
Антигенная структура . Вирусы бешенства не имеют антигенных разновидностей. Существуют два вируса бешенства: дикий, циркулирующий среди животных, вирулентный и для человека, названный уличным вирусом. Другой вирус бешенства получил Л. Пастер в лабораторных условиях путем последовательных, длительных пассажей (133 раза) уличного вируса через мозг кролика. При этом сократилась продолжительность инкубационного периода при заражении кролика с 21 до 7 дней. Дальнейшие пассажи уже не меняли время инкубации, оно зафиксировалось на 7 днях, и вирус был назван фиксированным (virus fixe). В процессе пассажей вирус адаптировался к мозгу кролика и потерял способность вызывать заболевания у человека, собак и других животных. Однако свои антигенные свойства он полностью сохранил, поэтому его используют для приготовления антирабической (против бешенства) вакцины.
Восприимчивость животных . Бешенством болеют многие животные, домашние и дикие, даже птицы. Однако чаще заболевают собаки, волки, лисицы, летучие мыши. Летучие мыши болеют без выраженных признаков заболевания и, возможно, являются хранителями вируса бешенства в природе.
Источники инфекции . Больные животные.
Пути передачи . Вирус бешенства передается прямым контактным путем от больных животных (укусы) либо при попадании слюны больного животного на поврежденную поверхность кожи или слизистых оболочек.
Патогенез . От момента укуса или ослюнения до заболевания человека проходит от 15-45 дней до 3-6 мес (описаны случаи инкубации свыше года).
Длительность инкубации зависит от ворот инфекции, характера повреждения ткани.
Наиболее короткий период инкубации при укусах в лицо и голову.
Из места внедрения вирусы распространяются по нервным стволам и попадают в клетки центральной нервной системы. Наибольшее количество вируса концентрируется в гиппокампе, продолговатом мозге, ядрах черепных нервов и в поясничной части спинного мозга. В нервных клетках вирус репродуцируется (размножается). В результате поражения нервной системы появляется повышенная рефлекторная возбудимость: судороги, особенно дыхательных и глотательных мышц. Возникает одышка и водобоязнь (гидрофобия). Одно представление о питье вызывает у больных сильные болезненные судороги. Смерть наступает через 4-5 дней. Летальность 100%.
Клиническая картина бешенства у собак: животное становится угрюмым, появляется слюнотечение. Собака начинает пожирать несъедобные вещи - камни, щепки и пр. Затем наступает период возбуждения. Собака бежит по прямой линии, низко наклонив голову. Нападает на встречающихся людей, животных без лая и кусает их. Период возбуждения сменяется параличами и гибелью животного.
Иммунитет . Постинфекционный иммунитет не достаточно изучен. Механизм иммунитета, возникающего после прививки, связан с вируснейтрализующини антителами, которые появляются через 2 нед после вакцинации, а также с интерференцией вакцинного и уличного вирусов. Феномен интерференции состоит в том, что фиксированный вирус значительно быстрее достигает клеток нервной системы, размножается в них и препятствует внедрению уличного вируса. Иммунитет сохраняется в течение 6 мес.
Профилактика . Уничтожение бешеных животных, бродячих собак. Регистрация собак и обязательная их вакцинация. В случае укуса немедленная обработка ран.
Специфическая профилактика . Введение антирабической вакцины, предложенной Пастером. Вакцина представляет собой взвесь мозговой ткани животного (кролика, мыши и др.), зараженного фиксированным вирусом бешенства. Имеются 2 типа вакцин: Ферми и Филлипса. Они отличаются между собой количеством и качеством консерванта. Вакцина Ферми содержит 1% фенол, Филлипса - глицерин.
В последнее время пользуются вакциной Флори. Это живая антирабическая вакцина, приготовленная из вирусов, культивированных в эмбрионах птиц. Принцип действия тот же (интерференция вирусов).
Вакцинации подлежат все укушенные или ослюненные больными или подозрительными в отношении бешенства животными. Противопоказаний нет, однако прививки не делают людям без достаточных показаний, так как даже фиксированный вирус может привести к осложнениям. Прививки делают как можно раньше, проводят их многократно. Вакцину вводят подкожно в область живота. Количество прививок назначает врач.
При укусах опасной локализации и для повышения эффективности вакцин применяют еще антирабический иммуноглобулин, который получают из сыворотки гипериммунизированных фиксированным вирусом лошадей. Иммуноглобулин обладает способностью нейтрализовать действие вируса. Кроме того, он предупреждает поствакцинальные осложнения (аллергический энцефаломиелит и др.).
В СССР и других странах мира проводят исследования, направленные на получение антирабической вакцины, не вызывающей осложнений.
Лечение . Не разработано.
Вирусологическая диагностика
Посмертная диагностика основана на: 1) обнаружении телец Бабеша - Негри в клетках мозга; 2) выявлении специфического антигена методом флюоресцирующих антител; 3) выделении вируса методом биопробы на лабораторных животных.
1. Тельца Бабеша - Негри могут быть обнаружены в окрашенных мазках и отпечатках из нефиксированной мозговой ткани и в гистологических срезах (даже в том случае, если мозг подвергается гниению). Для их обнаружения делают несколько препаратов (так как телец может быть мало). При окраске по Муромцеву цитоплазма нервных клеток голубого цвета, а тельца Бабеша - Негри - фиолетового с розовым оттенком и выраженной темно-фиолетовой зернистостью.
В клетках мозга больных бешенством животных тельца Бабеша - Негри обнаруживают чаще, чем в срезах, сделанных из слюнных желез.
2. Метод флюоресцирующих сывороток широкого практического применения пока не получил.
3. Метод биопробы на лабораторных животных проводится только в специальных лабораториях.
Работу, хранение и пересылку нефиксированного материала осуществляют по правилам, предусмотренным для работы с особо опасным инфекционным материалом (см. "Особо опасные инфекции").
Контрольные вопросы
1. Какова форма и величина вируса бешенства?
2. Что такое тельца Бабеша - Негри?
3. Что такое вирус fixe?
4. Какова восприимчивость животных к вирусу бешенства?
5. Как передается вирус бешенства?
6. Какой вирус бешенства используется для приготовления вакцины (уличный или вирус fixe?)
7. На чем основана вирусологическая диагностика при подозрении на бешенство?
Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.
Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.
Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результатов лабораторных исследований.
Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении телец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах.
В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.
Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мелких животных, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях допускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг - в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницаемую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологическим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.
Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).
Индикация и идентификация вируса . Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша - Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.
Обнаружение специфических телец-включений . Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматривают в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша - Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплазме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша - Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.
Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри - их внутренняя структура, позволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки - базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.
Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша - Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами идентификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравления змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследуется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).
ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном выполнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микроскопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в виде ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаруживают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.
Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод подавления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфическими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого головного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресцирующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким образом препаратах флюоресценции не должно быть.
Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предварительно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования подозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, покусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все правила личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим веком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для контроля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в течение 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.
В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубационного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера - от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного - не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более клеток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здоровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.
Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постановке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период заболевания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря материал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса неравномерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.
Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или латеральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них делают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с данными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корреляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.
РДП.
Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге животных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микрометодом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой методике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А - аммонов рог (правая сторона); В - кора головного мозга (правая сторона); С - мозжечок (правая сторона);
Д - продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) - положительный контроль; - (минус) - отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 - лунки с разведением специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно
Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастообразную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом (на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм гелем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.
РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в исследуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полученного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в исследуемом материале телец Бабеша - Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.
Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша - Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказывалась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.
Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции используют недостаточно разведенный материал.
В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скунсов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.
Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хомячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.
РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового отдела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнатной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.
ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.
В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА - наиболее перспективный лабораторный метод обнаружения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является техника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно превосходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.
Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термолабильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и "утиных" штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.
Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, используя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реагируют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии комплемента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ использовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика . Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT используют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксированный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выявлении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.
РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за наличия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствителен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувствительностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращенный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугированием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активностью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.
Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гусиных эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавлением 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, окончательный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус - через 1-1,5 ч.
Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связываться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммунной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие результаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.
Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сыворотке и гибридомных супернатантах.
Дифференциальная диагностика . Необходимо исключить болезнь Ауески, при которой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломиелите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.
Тельца Бабеша-Негри Тельца Бабеша-Негри
новообразования в пораженных вирусом бешенства нервных клетках головного мозга. Располагаются в цитоплазме клетки. Имеют овальную или палочковидную форму, размеры колеблются от 0,5 до 10 мкм. Выявляют в диагностических целях посмертно в мазках-отпечатках или срезах аммонова рога при специальных методах окраски.
(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)
Смотреть что такое "Тельца Бабеша-Негри" в других словарях:
Большой медицинский словарь
БабешаНегри тельца - [по имени румынского учёного В. Бабеша (V. Babes), 1887, и итальянского учёного А. Негри (A. Negri), 1903], специфические цитоплазматические включения, обнаруживаемые в нейронах центральной нервной системы у животных и людей, погибших от… …
БАБЕША - НЕГРИ ТЕЛЬЦА - [по имени рум. учёного В. Бабеша (V. Babes), 1887, и итал. учёного А. Негри (A. Negri), 1903], специфические цитоплазматич. включения, обнаруживаемые в нейронах ц. н. с. у животных и людей, погибших от бешенства. Представляют собой оксифильные… … Ветеринарный энциклопедический словарь
Бабеша Негри тельца - БАБÉШАНÉГРИ ТЕЛЬЦÁ [по имени румынского учёного В. Бабеша (V. Babes), 1887, и итальянского учёного А. Негри (A. Negri), 1903], специфические цитоплазматические включения, обнаруживаемые в нейронах центральной нервной системы у животных и… … Ветеринарный энциклопедический словарь
Большой медицинский словарь
- (V. Babes, 1854 1926, румынский бактериолог) см. Бабеша Негри тельца … Большой медицинский словарь
- (A. Negri, 1876 1912, итал. патолог) см. Бабеша Негри тельца … Медицинская энциклопедия
- (V. Babes, 1854 1926, румынский бактериолог; A. Negri, 1876 1912, итал. патолог; син.: Бабеша узелки, Негри тельца) цитоплазматические эозинофильные включения, обнаруживаемые в клетках гиппокампа при бешенстве … Медицинская энциклопедия
I Бешенство (rabies; синоним: водобоязнь, гидрофобия) инфекционная болезнь из группы зоонозов, возникающая после укуса или ослюнения инфицированным животным, характеризующаяся поражением центральной нервной системы. Этиология. Возбудитель Б.… … Медицинская энциклопедия
МУРОМЦЕВА МЕТОДЫ - (по имени советского микробиолога С. Н. Муромцева), способы окраски гистологических и микробиологических препаратов. Для выявления телец БабешаНегри препарат обрабатывают синькой Мансона (1:40) и затем дифференцируют 10% ным водным… … Ветеринарный энциклопедический словарь